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제품특징
□ 제품 설명
Uracil DNA Glycosylase (UNG)는 우라실을 포함한 DNA의 deoxyribose sugar와 우라실 염기 사이의 N-glycosylic bond를 가수분해하여 탈필리미딘 부위를 만드는 역할을 한다. 본 효소는 우라실을 포함한 single strand DNA와 double strand DNA는 가수분해하지만, RNA에는 작용하지 않는다.
□ 형상
| 20 mM | Tris-HCl, pH 7.5 (at 25℃) |
| 50 mM | NaCl |
| 1 mM | DTT |
| 0.1% (v/v) | Triton X-100 |
| 50% (v/v) | Glycerol |
□ 기원
Produced in an E. coli ung- strain expressing a recombinant clone of Gadus morhua (cod) liver UNG
□ Specific activity
> 500,000 U/mg
□ 활성의 정의
우라실을 포함한 DNA를 기질로 70 mM Tris-HCl, pH7.5 (at 25℃), 10 mM NaCl, 1 mM EDTA, 100 μg/ml BSA를 포함한 반응액 중 37℃에서 1시간 동안 1 nmol의 우라실을 유리시키는 효소 활성을 1 U로 한다.
□ 순도
1.Endonuclease activity :
50 U의 본 효소와 1 μg의 pGEM DNA를 37℃ 2시간 반응시켜도, DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.
2.Exonuclease activity : 50 U의 본 효소와 3H-labelled DNA를 37℃으로 2시간 반응시켜도, 유리의 방사 활성에 의한
exonuclease 활성은검출되지 않는다.
□ 열실활 (Inactivation by heat)
본 효소는 50℃, 10 분간 열처리를 하면, 완전히 비가역적으로 실활된다.
□ 사용 예
[PCR carryover prevention 사용방법] 1. 아래와 같은 PCR 반응액을 조제한다.
TaKaRa Taq Hot Start Version (5 units/μl) | 0.25 μl |
10×PCR Buffer (Mg2+ plus) | 5 μl |
dU plus dNTP Mixture (Code 4035) | 4 μl |
25 mM MgCl2 | 1.5 μl |
UNG (2 U/μl) | 0.5 μl |
Primer 1 | 10~50 pmol |
Primer 2 | 10~50 pmol |
멸균 증류수 | up to 50 μl |
2. 25℃로 10분 반응한다.
3. 95℃로 2분 열실활 한다.
4. 계속해서 PCR 반응을 실시한다.사용 예의 상세한 내용에 대해서는 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit(Code 6088)의 매뉴얼에서 확인할 수 있습니다. - 본 효소의 최적 사용량은 목적에 따라서 다르지만, 50 μl 반응시 통상 0.1~1 U를 사용한다. - 본 효소는 일반적인 PCR 및 RT-PCR의 반응액 중에서 작용한다.
□ 보존
- 20℃
