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제품특징
□ 제품설명
지아르디아증은 지아르디아(Giardia lamblia：이명 G. intestinalis 또는 G. duodenalis)의 감염에 의해서 일으켜지는 설사증 질환이다. 지아르디아는 편모충류에 속하는 원생 동물로 사람이나 동물(고양이, 개, 소, 사슴등)의 장에 기생해 분변에을 통해 식품이나 음료수에 오염되어 사람에게 경구 감염된다. 지아르디아의 포낭으로 분변에 들어있는 시스트는 감염력이 강하고 물속에서 수개월 정도 감염력을 잃지 않고 존재한다는 보고도 있으며, 소형이기 때문에 정수 처리에 의해 완전 제거가 어렵고 염소 소독에도 저항성을 나타낸다. 검출 방법으로서는 형광 항체 염색이나 요드·요드 칼리 염색에 의한 세균 검사법으로 확인을 하고 있다.본 제품은 지아르디아18S rRNA유전자를 타겟으로서 지아르디아 유래 RNA를 역전사 하여 cDNA 검출 kit이다. Genome DNA에 대해 RNA는 카피수가 많은 것으로 알려져 있기 때문에 RNA를 대상으로 한 RT-qPCR에 의해 미량의 지아르디아를 검출할 수 있다. 본 kit의 증폭 반응에는 Hot Start PCR용 효소인 TaKaRa Ex Taq Hot Start Version을 사용하고 있어 비특이적 증폭을 억제하면서 고감도의 검출이 가능하다. 증폭 산물의 검출에 사이클링 probe법을 채용하고 있다. 이 방법은 RNA와 DNA로부터 chimera probe와 RNaseH의 조합에 의한 고감도 검출 방법으로 매우 특이성의 높은 검출이 가능하다.본 kit에는 지아르디아18S rRNA유전자를 검출하기 위한 FAM probe와 internal control DNA와 internal control 검출용 ROX probe가 포함되어 있어 2가지를 동시에 모니터링 하는 것으로 1개의 tube에서 지아르디아 유전자의 검출과 internal control DNA의 검출에 의해 음성 확인 실험이 가능하다.Giardia Positive Control을 이용해 검량선을 작성하는 것으로 샘플중에 포함되는 지아르디아의 정량도 가능하다. 또한 본 kit에 의한 PCR증폭 산물의 sequencing을 통해 유전자형의 해석이 가능하다.
□ 내용
(25 μl 반응, 50회)
1. | 5×PrimeScript RT Master Mix | 5×conc. | 100 μl |
2. | 2×Cycleave Reaction Mixture (Giardia) | 2×conc. | 625 μl |
3. | GiardiaPrimer/Probe Mix(FAM,ROX)*1 | 5×conc. | 250 μl |
4. | RNase Free dH2O | 1 ml | |
5. | Lysis Buffer | 625 μl×4 | |
6. | Proteinase K | 20 mg/ml | 50 μl |
7. | dH2O (for Dilution) | 150 μl | |
8. | Giardia PositiveControl*2 | 1×105 copies/μl | 50 μl |
9. | EASY Dilution (for Real Time PCR) | 1 ml×2 | |
*1 형광 표지 probe를 포함하고 있으므로 암소에 보관 필수.*2 Reai tim PCR competent (1~4)에 잘못 혼입하면, 올바른 검출 반응을 실시할 수 없게 된다. 개봉 후 PCR컴퍼넌트(1~4)는 제공된
별도 kit case로 옮겨 보존한다.
□ 보존
- 20℃
□ 검출 가능한 종
- 검출이 가능한 종 Giardialamblia (Assemblage A)- Giardia Primer/ProbeMix 의 서열 정보를 토대로 검출이 가능할것이라고 추측되는 종 Giardia lamblia (Assemblage B,Assemblage C ,Assemblage D,Assemblage E)Giardia psittaciGiardia microti - 이하의 종에 대해서는 교차 반응이 없는 것을 확인하였다. Cryptosporidium parvum
