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제품특징
□ 제품설명
본 제품은 세균류의 16S ribosomal DNA(rDNA)영역내의 특정 영역(약 0.8 kb)을 증폭할 수 있는 시약과 PCR증폭 산물의 sequencing용primer로 구성되어 있다. 본 제품으로 증폭된 PCR 산물은 sequencing으로 분석된 염기서열과 데이터베이스내서열과 상동성을 검색하여 세균을 분류 할 수 있다. 개량형 Taq DNApolymerase를 사용해서 고속 PCR조건에서 신속하게 PCR증폭을 실시할 수 있다. 또한 항체를 이용한 hot-start PCR 효소로 cycle 전 mis-priming이나 primer-dimer 유래의 비특이적 증폭을막을 수 있다.※본 제품에 제공되는 primer를이용한 분석과정은 16차 개정된 JapanesePharmacopoeia의 “RapidIdentification ofMicroorganisms Using Genetic Analysis” 부분에 수록되어 있다. [주의] 세균 종류에 따라 본 키트로 PCR증폭할 수 없는 경우가 있다.진균의 경우는 Fungal rDNA(ITS1)PCR Kit Fast(CodeRR183A)또는 Fungal rDNA(D1/D2)PCR Kit Fast(Code RR184A)을
이용하십시오.
□ 내용
(25 μl PCR반응, 50회)
1. | TaKaRaTaq HS Fast Detect Premix(2×) | 625μl |
2. | 16S rDNA Primer Mix (800)*1 (10x) | 125μl |
3. | dH2O | 650μl |
4. | Positive Control (E. coli DNA) (1 ng/μl) | 25μl |
5. | Sequencing Primer 10F (7.5 pmol/μl) | 50μl |
6. | Sequencing Primer 800R (7.5 pmol/μl) | 50μl |
＊1 16S rDNA Primer Mix(800)에 포함되는 primer는 Sequencing Primer 10F와 Sequencing Primer 800R과 같은 서열이다.
□ 보존
- 20℃TaKaRaTaq HS Fast Detect Premix에는PCR효소가 포함되어 있기 때문에 동결 융해를 자주 반복하면 활성이 낮아지는
경우가 있다. 녹일 때 격렬한 vortex를 피하고 융해 후에는 부드럽게 잘 섞어준다.
□ DNA증폭 산물의 서열 분석
제품에 포함된 Sequencing Primer 10F로 증폭 산물의서열을 분석한다.필요에 따라 Sequencing Primer 800R을 사용해 양방향분석을 실시한다. 양방향으로 분석하면 정밀도 높은 데이터를 얻을 수
있다.
□ 염기 서열 정보의 해석
염기서열 정보를 데이터베이스 상의 상동서열 검색을 통해 세균의 종류를 유추한다.
□ 별도로 필요한 주요 시약과 기기
유전자 증폭 시스템(authorized instruments)TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch (Code TP350)TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient/Standard(Code TP600)PCRtube*0.2 ml Hi-Tube Dome Cap (Code NJ200)0.2 ml Hi-Tube Flat Cap Recovery (Code NJ203)0.2 ml Hi-8-Tube (Code NJ300)0.2 ml Hi-8-Dome Cap (Code NJ301)0.2 ml Hi-8-Flat Cap (Code NJ302) Agarose전기 영동 장치 Mupid-2plus (Code AD110)Mupid-exU (Code AD140)Mupid-One (Code AD160) AgaroseGelSeaKem LE Agarose, Lonza (Code 50004)NuSieve 3:1 Agarose, Lonza (Code 50091)DNAStainingGelStar Nucleic Acid Stain(Code 50535), TB Green™(Code 50512/50513), EtBr주의) GelStar, TB Green™를 사용하는 경우는 전용필터가 필요합니다. PCR산물정제 시약 TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit (Code9762A)TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit (Code9761A)
