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제품특징
□ 특징
● 실시간으로 개별 세포나 전체 세포군에서 proteasome의 활성 관찰
● 쉬운 비파괴적 (noninvasive) 검출
● Multi-well screening 분석법을 이용한 proteasome inhibitor 확인
Proteasome Sensor Vector는 proteasome에 민감한 fluorescent protein인 ZsProSensor-1를 발현한다. 이 단백질은 mouse ornithine decarboxylase degradation domain (MODC)과 발현된 ZsGreen의 C-말단에 fusion되어 있다. MODC는 proteasome에 의해 빠르게 분해되는 단백질을 표적으로 한다.Proteasome이 세포에서 정상적으로 작동할 때는 어떠한 green 형광도 축적되지 않지만, proteasome이 저해될 때에는 ZsProSensor-1이 빠르게 축적된다. 따라서, green 형광의 증가는 proteasome 활성이 감소되는 것을 의미하며, 현미경이나 flow cytometry 또는 96-well plate reader로 측정할 수 있다 (Figure 1).다른 방법으로 cell-based assays에서 proteasome 활성을 관찰하기 위하여 안정적으로 transfection 된 HEK 293 proteasome sensor cell line를 사용할 수 있다.
Figure 1. Proteasome activity in living cells. HEK 293 cells stably transfected with the Proteasome Sensor Vector were selected in G418 and sorted by flow cytometry, and then treated with 10 μM ALLN for the indicated times. ALLN is a peptide aldehyde (Ac-Leu-Leu-Nle-al) that reversibly inhibits the proteasome’s chymotrypsin activity, preventing it from attacking the ZsProSensor-1 protein. As a result, ZsProSensor-1 quickly accumulates, resulting in a strong green emission signal that can be measured by fluorescence microscopy (Panel A), flow cytometry (Panel B), or fluorometry with a 96-well plate reader with FITC filter sets (Panel C).
□ Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
□ References
1. Proteasome Sensor Vector (April 2003) Clontechniques XVIII(2):14.
