□ 특징

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● 적은 양의 total RNA 또는 poly A+ RNA로부터 고품질의 cDNA library 제작

● 최소 50 ng의 total RNA에서 cDNA 합성 가능

● 독창적인 SMART cDNA 합성법으로 full-length cDNA를 포함하는 library 제작

● Adaptor ligation 과정 불필요

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SMART cDNA Library Construction Kit는 phage λTriplEx2 vector에 full-length cDNA를 cloning하는 제품이다. 이 제품은 cDNA증폭을 위한 SMART 기술과 adaptor 없이 λTriplEx2 vector에 cloning하는 기술을 이용하며 초기 시료 양에 따라 두 가지 실험 과정으로 나눠져 있다. 첫 번째 과정은 새롭게 고안된 long-distance PCR(LD-PCR) 방법으로 50 ng정도의 적은 양의 RNA 시료에 적용할 수 있다 (1). 두 번째 과정은 좀 더 일반적인 과정으로 비교적 많은 양의 초기 시료 (예를 들면, 1 μg 또는 그 이상의 poly A⁺ RNA)을 사용하는 실험자에게 적합하다. 두 과정 모두 많은 양의 full-length의 double-strand cDNA를 합성하기 위하여 1st strand 합성과정에서 SMART IV Oligonucleotide를 이용한다. 두 실험 과정 모두 UserManual에 표기되어 있으며 각자의 실험에 맞게 선택하도록 한다. 각각의 kit는 cDNA library 7회 제작 분이다.또한, 포유류 발현용 vector인 pEXP-Lib, retroviral expression vector인 pRetro-Lib 등 SMART cDNA Library Construction Kit와 함께 사용할 수 있는 7가지 vector가 별도 판매되고 있다.SMART library는 기존의 전통적인 방법에 비해 매우 높은 효율로 전체길이를 포함하는 clone을 제작할 수 있다. 따라서 SMART cDNA library에서 선별된 clone은 mRNA의 5、-untranslated region을 완전히 포함하게된다 (2).RNA/cDNA Quality Assay를 사용하면 실험을 시작하기 전에 초기 시료로 사용되는 human RNA의 상태를 확인할 수 있다. 본 실험에는 RT-PCR법이 이용되므로 실험에 적용할 full-length cDNA가 증폭되는지 여부를 직접적으로 확인할 수 있다. 기존의 실험실에서 사용하던 장비들을 이용하므로 빠르게 RNA 상태를 확인할 수 있을 뿐만 아니라 불편하고 유해한 formaldehyde gel을 제작할 필요도 없다.Figure 1. Comparison of SMART cDNA synthesis vs. conventional synthesis for library construction.