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제품특징
□ 특징
- 10 pg만의 total RNA로도 높은 감도 및 증폭 효율을 실현- TaqStart antibody에 의한 hot start PCR로 특이성 향상- cross contamination을 방지- 유전자 발현 level의 비교가 간편하며 단시간에 가능TITANIUM One-step RT-PCR Kit은 사용하기 쉬운 조작에 의한 최신 RT-PCR Kit이다. 모든 반응을 1개의 tube에서 수행되기 때문에, cross contamination 문제가 발생하지 않는다. 본 Kit은 간편할 뿐만 아니라 상당히 high-sensitivity와 높은 증폭 효율을 갖고 있다. One-step RT-PCR법은 다른 시료에서의 유전자 발현 level 비교에 이상적이다. 또한 본 Kit은 상당히 high-sensitivity이므로 RT-PCR을 분석 목적에 사용할 때에도 높은 신뢰성을 얻을 수 있다.
□ 향상된 One-step법
기존 방법에서는 reverse transcription 반응과 PCR 반응을 별도의 단계로 실시하기 때문에 각 실험 단계에 시간이 필요하고 시료의 crossover나 contamination의 가능성도 있었다. 반면 TITANIUM One-step RT-PCR는 RT 반응에서부터 PCR cycling까지 tube의 개폐나 별도의 시약 첨가를 하지 않고 한번에 진행할 수 있다. 고성능의 TITANIUM One-step RT-PCR Kit은 다음과 같은 특징을 가지고 있다.
● Hot start PCR에 의한 특이성과 감도 향상TITANIUM RT Taq enzyme mix에는 hot start PCR용 TaqStart antibody가 포함되어 있다(1~3).
● RNA 2차 구조 발생에 의한 문제 최소 열 안정성이 높은 시약에 의해 reverse transcription반응을 50 ℃에서 실시할 수 있다.
유전자 특이적 primer를 이 온도에서 사용하면 역전사 반응의 특이성이 향상된다.
복수의 RNA 시료로 실험 할 경우, One-step RT-PCR법은 가장 적합한 방법이다. 단, 단일 RNA를 source로 하여 복수의 fragment를 증폭할 경우는 reverse transcription반응액이 1종류이면 되므로 2step RT-PCR 방법이 실제로는 효율적일 수 있다. 2step법의 실험에는 PowerScript reverse transcriptase 또는 Advantage RT-for-PCR Kit을 사용할 것을 권장한다.
그림1. TITANIUM One-Step RT-PCR가 뛰어난 고감도mouse liver에 유래하는 다른 양의 total RNA를 TITANIUM One-Step RT-PCR의 주형으로서 사용해,β-actin의 전사 산물을 증폭했습니다. 목적 transcript는 50℃으로 1시간동안 역전사 반응을 수행하고40 cycle의 PCR로 증폭했다. RT-PCR 산물은 EtBr/agarose gel 전기 영동했다. Lane 1：1μg의 total RNA, Lane 2：100ng, Lane 3：10ng, Lane 4：1ng, Lane 5：100pg, Lane 6：10pg, Lane 7：1 pg, Lane 8：template 없음, Lane M：DNA size marker
그림 2. 현재 시판되고 있는 One-step kit보다 높은 효율의 TITANIUM One-Step RT-PCR TITANIUM One-Step RT-PCR Kit와 2개 타사 One-step kit를 이용하여 반응을 수행하였다. 각사가 추천하는 조건에서 동일한 반응시켰습니다. RT-PCR 산물은 EtBr/agarose gel 전기 영동에의해 해석했습니다. 각 반응 모두 human placenta total RNA(1μg)를 주형으로서, 9 종류의 human transcript를 증폭했다. Lane M: DNA size marker
□ 구성물
TITANIUM RT Taq Enzyme Mix One-Step Buffer dNTP Mix Thermostabilizing Reagent GC-Melt Oligo(dT) Primer Recombinant RNase Inhibitor Control Mouse β-Actin Primers Control Mouse Liver Total RNA RNase-Free H2O User Manual (PT3397-1) Protocol-at-a-Glance (PT3397-2)
□ 보존
-70℃：Control Mouse Liver Total RNA-20℃：그외 모든 시약
