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제품특징
□ 특징
● 일본 후생노동성에서 공지한 공정법의 염기서열을 이용한 primer, Dual-Labeled Probe를 채용한 Real Time PCR kit
● 사용이 편리한 premix 형태로 제공
● 정량이 가능한 Positive Control을 포함한 all-in-one kit
□ 제품설명
Kudoa septempunctata (18S rRNA) qPCR Detection Kit은 후생노동성 의약식품국 식품안전부 감시안전과에서 공지한 「Kudoa septempunctata의 검사법에 대해(잠정판)」 (
0711 제1호)(이하「공정법」이라고 기재한다)와 동일한 염기 서열의 primer와Dual-Labeled probe를 사용한 Kudoaseptempunctata 검출 제품이다. Kudoa septempunctata는 물고기의근육에 기생하는 점액 포자충이며, 넙치에 의한 식중독 원인 중의 하나로 생각되고 있다. 본 제품의 증폭 반응에 이용하는 Premix Ex Taq은 anti-Taq 항체를 이용한 hot start PCR용 효소, TaKaRa Ex Taq® HS와Real Time PCR에 최적화된 버퍼를 이용하여, 비특이적 증폭을 억제해, 높은 증폭 효율, 높은 검출 감도로 Real Time PCR를 실시할 수 있다. 또, 반응 시간이 짧은 고속 PCR에도 적용가능하다. 증폭 산물 검출에는 공정법과 같은 FAM (reporter)/TAMRA (quencher)로표지 된 Dual-Labeled probe를 채용하고 있다. Dual-Labeledprobe는 5’말단을 형광 물질 (FAM 등)로, 3’말단을 quencher 물질(TAMRA 등)로 수식한oligonucleotide이다. Annealing 조건하에서 Dual-Labeled probe는 주형 DNA에 특이적으로 결합하지만, 형광은 quencher 에 의해서 억제된다. 신장 (extention) 반응시 Taq DNA polymerase가 가지고 있는 5’→3’ exonuclease 활성에의해, 주형 DNA에 결합한 Dual-Labeled probe를 분해하여, quencher에 의한억제를 없애 형광을 발하게 한다. 이 형광 강도를 측정하여 증폭 산물을 모니터 할 수 있다.
□ 내용
| Kudoaseptempunctata (18S rRNA)qPCR Detection Kit (Code RR260, 20㎕ 반응시 50회분량) | |
| 1.Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)(2×conc.) | 500 ㎕ |
| 2.Kudoa Primer/Probe Mix (10×conc.)*1 | 100 ㎕ |
| 3.dH2O | 1 ㎖ |
| 4.ROX Reference Dye (50×conc.)*2 | 20 ㎕ |
| 5.ROX Reference Dye II (50×conc.)*2 | 20 ㎕ |
| 6.Kudoa Positive Control (2.5×107 copies/㎕)*2 | 50 ㎕ |
| 7.EASY Dilution (for Real Time PCR) | 1 ㎖ × 2개 |
*1 형광표지 probe(FAM-TAMRA 표지)를 포함하고 있으므로, 차광에 유의해 주세요. *2 Real Time PCR 반응액(1~5)에 잘못해 혼입되면, 올바른 검출 반응을 실시할 수 없으니, 오염에 특별히 주의한다.
□ 보존
- 20℃ Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)는 융해 후 4℃로 보존하며, 반복적인 동결 융해를 피해주십시오. 4 ℃에서 6개월간 안정합니다. 장기 보존이 필요한 경우에는 최초 융해시 소량씩 분주하여 -20 ℃에 보관하는것을 추천합니다.
□ 본 제품 이외에 필요한 시약, 기기(주된 것)
Real Time PCR용 기기 및 전용 tubeThermal Cycler Dice Real Time System II (Code TP900/TP960)Thermal Cycler Dice Real Time System Lite (Code TP700/TP760)Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System(Life Technologies) 등탁상용 원심분리기 200 μl, 20 μl, 10 μl 각 micropipetteMicropipette 용 tip(필터 장착 tip)
□ Kudoa Positive Control를 이용하는 정량 해석에 대해
본 제품에 포함되어 있는 KudoaPositive Control은 다카라바이오에서 합성한 Kudoa septempunctata의배열을 가지는 plasmid DNA이다.EASY Dilution(for Real Time PCR)을이용하여 Kudoa Positive Control을 단계 희석하여, 검량선을작성하면 정량 해석이 가능하다. [※ 해석법에 대해서는 공정법을참조해 주세요.]
