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제품특징
□ 특징
● The Cas9 protein solution is sterile and well-tolerated by mammalian cells
● Highly efficient editing when combined with Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code 632636)
● Minimizes off-target effects-better than plasmid-based delivery systems
● Works well in hard-to-transfect cell lines
□ 제품설명
Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready)은 Streptococcus pyogenes 유래의 Cas9 재조합 단백질로써 CRISPR/Cas9 gene editing 실험에사용할 수 있도록 C-terminal nuclear-localization signal (NLS) 변형이되어 있다. Cas9-sgRNA ribonucleoprotein(RNP) 복합체의 electroporation은 빠른 시간 내 gene editing이가능하도록 하며, 또한 off-target effect를최소화 할 수 있다. 본 제품은 Transfection 시약에 의한 RNP delivery에도 적용가능하며, 이 경우 Mirus의 TransIT-X2 Dynamic DeliverySystem (Code MIR 6000) 사용을추천한다 (그림 4. 참조)
그림 1. Gene knockouts in theCellartis hiPSC-18 cell line. Thestrength of the cleaved bands gives a semiquantitive estimate of the percentageof edited cells. As can be seen, the Guide-it recombinant Cas9, when combinedwith sgRNA from the Guide-it In Vitro Transcription Kit,provides consistent and effective gene editing for many targets. Numbers at thebottom of each gel represent gene editing efficiencies (expressed as a %) forthe indicated RNPs.
그림 2. Homology-directed repair at theAAVS1 or CXCR4 genes. A template containing aHindIII restriction site was inserted into the AAVS1 gene, and a templatecontaining both a HindIII and a BamHI restrictrion site was inserted into theCXCR4 gene. Gene targets were then amplified from target cells using PCR andanalyzed by restriction digest. Editing efficiencies are shown above each positive well on the gel. The extra band in the BamHI digest of the CXCR4 geneis due to a second BamHI site already present in the wild-type gene beforeediting.
그림 3. Guide-it™ RecombinantCas9 (Electroporation-Ready)과 타사 Cas9 단백질의 Konck-out 효율비교 Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready)과 타사의 Cas9protein을 이용하여, Human iPS cell에서 CD81 유전자를 타겟하는 sgRNA-Cas9 RNP 복합체를 Neon Transfection System (Thermo Fisher Scientific)으로 Electroporation 도입하였다. 그 결과, 타사의 Cas9 단백질에 비하여 월등히 높은 Knock-out 효율을 얻을 수 있었다 (자사 실험데이터, n=2x3 times) 
그림 4. Guide-it™Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready)와 TransIT-X2를이용한 iPS cell gene editing PPIB (Cyclophili B)에 대한 2개의 guide RNA (gRNA)와 Cas9 protein (타사 제품 또는 Guide-it RecombinantCas9 protein) 복합체 (RNP)를 형성하였다.그 후, RNP 복합체를 TransIT-X2 Dynamic DeliverySystem (Code MIR 6000) (1㎕/well 첨가, 24-wellplate, Mirus Bio) 를 이용하여 iPS cell (KOLF-2, WellcomeTrust Sanger Institute)에 Transfection 방식으로 도입하였다. 여러 농도의 guide RNA를 조합한 RNP 복합체 도입 후, T7E1 mismatch detection으로절단 효율을 확인한 결과 타사 제품 대비하여 보다 높은 절단효율을 확인할 수 있었다.
□ 관련 제품
Guide-itComplete sgRNA Screening System (Code 632636)- Gene delivery에적용가능한 10-20ug의 고수율, 고순도 sgRNA 합성- sgRNAcandidates 중 가장 editing 효율이 높은sgRNA 스크리닝TransIT-X2 Dynamic Delivery System (Code MIR 6000)- DNA, siRNA, miRNA 각각 또는 Co-transfection 가능한 만능 Transfection 시약 - CRISPR/Cas9을 위한 sgRNA-Cas9 RNP delivery에도 효율적
