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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 350 U/㎕
□ 형태
| 10 mM | Tris-HCl (pH7.5) |
| 50 mM | KCl |
| 10 mM | 2-Mercaptoethanol |
| 0.1 mM | EDTA |
| 50% | Glycerol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성(10×)
| 660 mM | Tris-HCl (pH7.6) |
| 66 mM | MgCl2 |
| 100 mM | DTT |
| 1 mM | ATP |
□ 기원
Escherichia coli carrying the plasmid that enables high expression of T4 DNA ligase gene
□ 제품설명
본 효소는 인접한 DNA 가닥의 5’-P 말단과 3’-OH 말단을 phosphodiester 결합으로 연결하는 효소이다. 보조인자로 ATP를 요구하고, 반응 중간물로 enzyme-ATP complex가 만들어지며 이것이 DNA에 작용한다. 본 효소는 돌출말단(cohesive end), 평활말단(blunt end)간을 연결한다. 또 DNA의 5’-P 말단과 RNA의 3’- OH 말단, RNA의 5’-P 말단과 DNA의 3’-OH 말단의 연결활성 그리고 극히 낮은 RNA 말단 간의 연결활성도 갖고 있다.
□ 활성의 정의
6 ㎍/20 ㎕의 λDNA-Hind III 분해물을 16℃, 30분 동안 90% 이상 연결하는 효소활성을 1 U으로 한다.본 효소 1 U는 ATP-PPi 교환반응에 의한 0.008 Weiss Unit에 상당한다.
□ 활성 측정용 반응액 조성
| 66 mM | Tris-HCl (pH7.6) |
| 6.6 mM | MgCl2 |
| 10 mM | DTT |
| 0.1 mM | ATP |
| 6 ㎍/20 ㎕ | λDNA-Hind III 분해물 |
□ 순도
- 2,000 U의 본 효소와 1㎍의 λDNA-Hind III 분해물을 37℃, 24시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.- 2,000 U의 본 효소와 1㎍의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃, 24시간 반응하여도 DNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지
않는다.- 2,000 U의 본 효소와 1㎍의 5S rRNA을 37℃, 24시간 반응하여도 RNA의 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
□ 사용상의 주의
라이게이션 반응은 말단 염기서열의 종류에 따라 반응속도가 다르다. 일반적으로 다음과 같은 경향이 있다.
돌출말단 | Hind III ＞ Pst I ＞ EcoR I ＞ BamH I ＞ Sal I(Hind III site는 Sal I site 보다 10~40배 빠르게 라이게이션한다) |
| 평활말단 | Hae III ＞Alu I ＞ Hinc II ＞ Sma I(Hae III site는 Sma I site 보다 5~10배 빠르게 라이게이션한다)EcoRV ＞ Sca I ＞ Pro II ＞Nru I |
□ 용도
- Insert DNA와 vector DNA의 연결- DNA 단편과 linker 또는 adaptor DNA와의 연결
□ 관련제품
DNA 라이게이션 Kit Ver.1, Ver.2.1 (TaKaRa Code 6021, 6022)DNA 라이게이션 Kit<Mighty Mix> (TaKaRa Code 6023)TaKaRa DNA 라이게이션 Kit LONG (TaKaRa Code 6024)
