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SYSY定制单克隆抗体服务-小鼠和大鼠单克隆

Synaptic Systems提供专业服务，为客户的特定需求提供个性化解决方案。提供从肽合成或蛋白质表达到单克隆抗体生产以及杂交瘤细胞长期保存的完整服务。

抗体开发

标准协议包括以下步骤：

第一阶段/免疫：

对于免疫，需要3 mg纯化的肽或1 mg纯化的蛋白质（如果需要Western blot筛选，则为2 mg蛋白质）。作为一般程序，每只用90至150 µg免疫三只Balb / c小鼠或Lewis大鼠。如果抗原的免疫原性至关重要（例如小鼠/大鼠蛋白质或肽），则可以使用特殊菌株。
有两种不同的免疫策略。在我们的简短程序中，每两天和融合前一天对动物免疫17天。通常，这会产生针对中度至高亲和力的针对免疫原不同表位的广谱单克隆抗体。
在我们的长期免疫计划中，每三周在融合前不久对动物进行三个月的免疫。B细胞的亲和力成熟时间越长，变异越小，但亲和力通常越高。
取决于抗原，可以使用不同的免疫刺激剂，如Gerbu或不完全弗氏佐剂与CpG寡核苷酸结合使用（Krieg AM2002。ImmunaryReview of Immunology 20：709-60）。

第二阶段/融合：

免疫后，制备所有三只动物的膝盖淋巴结和脾脏的细胞，并在PEG 1500存在下与Ag8骨髓瘤细胞融合。融合后，将细胞铺板在24孔板上，产生360个寡核苷酸克隆，每个克隆通常由5个寡核苷酸组成-10个克隆。将细胞在仅选择融合细胞的选择性和条件培养基中培养10天。

第三阶段/筛选和亚克隆：

在接下来的两天内，通过ELISA筛选所有360个寡克隆克隆上清液中的抗体阳性孔。
对于下一步筛选，我们提供四个选项：

1. 在Synaptic Systems的Western印迹中测试了多达72个寡克隆克隆上清液。

2. 在Synaptic Systems，通过GFP转染的细胞的免疫荧光测试了多达360个寡克隆克隆上清液。

3. 在Synaptic Systems，通过特定的夹心ELISA筛选多达360个寡克隆克隆上清液，以鉴定捕获或检测抗体。

4. 最多可将20种寡克隆上清液（每次3-5毫升）运送给客户，以根据自己的条件进行筛选。

通常，筛选会在三周内完成。在客户决定应该对哪个寡核苷酸克隆进行亚克隆后，通过有限稀释法将所选的寡核苷酸克隆为单克隆。根据客户选择的选项（1-4）筛选亚克隆，并扩展到下一个亚克隆周期。为了获得真实，稳定的克隆，可能需要几个亚克隆周期，然后将其用于生产100 ml单克隆抗体上清液。
如果需要，阳性克隆将被冷冻，并备份长达12个月。可应要求长期存放。