CN107385014A_一种直接定量检测循环miRNA的RT‑qPCR方法在审

专利基本信息

申请号	CN201710442989.5	申请日	2017-06-13
公开（公告）号	CN107385014A	公开（公告）日	2017-11-24
申请公布号	CN107385014A	申请公布日	2017-11-24
分类号	C12Q1/68(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
发明人	苟德明;牛燕琴;康康	申请（专利权）人	深圳大学
代理机构	广州番禺容大专利代理事务所（普通合伙）	代理人	刘新年
地址	518060 广东省深圳市南山区南海大道3688号粤海门广场A207
摘要	本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种不需提取核酸，直接检测血清或血浆中循环microRNA(miRNA)的实时荧光定量RT‑qPCR方法。所述方法包括：S1：裂解血清或血浆中的外泌体及miRNA蛋白复合体，离心后得到循环miRNA粗提物；S2：miRNA加尾及逆转录；S3：RT‑qPCR定量检测。本发明miRNA直接荧光定量RT‑qPCR扩增方法[Direct S‑Poly(T)Plus,简称DSPP]中，不需要提取核酸，且miRNA的Poly(A)加尾和逆转录将在一个反应体系中同步完成，操作简便，缩短时间，可在95分钟内完成cDNA的制备。该技术体系灵敏度与stem‑loop方法相比提高数十甚至上百倍，建立了一种非常简便、灵敏、高效、快捷、廉价的miRNA检测的技术体系。该技术体系尤其适合于临床应用推广及其从miRNA丰度较低的生物体液样本中检测miRNA。

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