多克隆抗体有哪些优势？

多克隆抗体价格低廉，制备时间短（通常为 4-6 周）。多克隆抗体识别抗原的多个表位。即使在构象或聚集发生微小变化时，它们也更有可能保持对抗原表位的识别。因此，它们是检测变性蛋白质的首选。多克隆抗体还能够识别具有不同亲和力的不同表位。由于这种能力，多克隆抗体比单克隆抗体具有更广泛的潜在应用。

哪些动物被用来产生多克隆抗体？

山羊

应该用多少只动物？

通常每种抗原使用一只动物。由于动物之间的抗原反应不同，因此建议至少使用两只动物进行抗体生产。使用多只动物允许 wider 在抗体质量/亲和力/特异性方面的反应。但是，如果抗原在过去已成功用于产生抗体，那么一只动物可能就足够了。

可以使用什么类型的抗原？

Sicgen 免疫方案可适用于重组和天然蛋白质、结合肽和其他半抗原。诱导足够免疫反应所需的最小分子量为 10-12 kDa。为了产生对小分子（也称为半抗原）的免疫反应，应与较大的载体蛋白结合。 SICGEN 可以通过氨基酸半胱氨酸上的磺基键将这些半抗原与载体蛋白结合，制成免疫原。对于载体蛋白，SICGEN 通常使用大蛋白 KLH（匙孔血蓝蛋白）来偶联合成肽。 KLH 与 BSA（牛血清白蛋白）等载体蛋白相比很有用，因为它与 ELISA 或 Western Blots 封闭试剂没有反应性。生物危害物质不接受用于免疫接种的药物。

抗原可以以什么形式提供？

在缓冲液中冻干、溶解或沉淀（浓度 0.1-1mg/ml 或更高），在硝酸纤维素中，在聚丙烯酰胺凝胶中可进行考马斯染色；作为 pH 中性的碎片（由于在水中清洗 2-3 次）并保持湿润（在蒸馏水中），每次注射最多 1000 微升溶胀凝胶

什么应该抗原的纯度？

蛋白质至少有 90-95%，肽至少有 70-80%。

标签会干扰抗体产生吗？

通常，GST（谷胱甘肽 S-转移酶）和 MBP（麦芽糖结合蛋白）等标签具有免疫原性，因为它们是包含许多表位的大蛋白。最好使用没有这些类型标签的抗原蛋白，但是也可以使用它们。然而，其他小标签，如FLAG-tag、Myc-tag、V5-tag和His-tag不干扰特异性抗体的产生。

什么是每只动物需要多少抗原？

浓度为 0.1-1 mg/mL 的蛋白质溶液 1-2 mg 通常就足够了。

凝胶中的蛋白质 1 mg。更少的量可能就足够了。10 毫克的肽足以满足我们所有的服务需求。但是，如果您的肽是 70-80%，我们需要 6-7 毫克，如果它 >90%，我们只需要 4-5 毫克。如果您对抗体的亲和纯化感兴趣，我们将需要 3-6 毫克的肽，最好是干燥形式。10 毫克的偶联肽通常就足够了。如果肽是高度纯化的，少量可能就足够了。

其他抗原请联系。

Formmailto:technical@sicgen.pt 亲和纯化抗体，额外 2-5 mg制备免疫亲和柱需要 1 克可溶性蛋白质或 5 毫克肽，最好是干燥形式。如果有其他数量或浓度可用，请联系。提供与使用的缓冲液和蛋白质浓度相关的信息。

在 SuperFast 和 Standard protocols 500-600 µg 蛋白质或肽用于第一次免疫，250-300 µg 蛋白质或肽用于其他免疫。每只动物总计 1,000 µg -1,200 µg（SuperFast）或 1,500 µg – 1,800 µg（标准）蛋白质或肽。

如果没有蛋白质或肽的总量，项目是否可以开始？

是的，可以。将可用的免疫原数量发送给 SICGEN，项目将启动。剩下的等有空了再发。

应该发什么抗原相关的信息？

蛋白质：分子量、纯度缓冲液和浓度；重组蛋白：融合部分和表达系统；天然蛋白质：来源；肽：序列、纯度和数量；结合肽：序列、蛋白载体、纯度和数量。（在订单上查看）

免疫抗原应该如何制备？

蛋白质应在缓冲盐溶液（HEPES、磷酸盐、Tris-HCl、MOPS 等）中提供，作为冻干液ilizate 或聚丙烯酰胺凝胶片。切片凝胶应在水中脱色，以去除可能导致蛋白质进一步变性的酸。所需的抗原浓度为 0.1-1 mg/ml，但也可以接受更低的浓度。肽应为干燥形式，除非它与载体蛋白（如 KLH 或 BSA）结合。当与载体蛋白偶联时，肽应在浓度至少为 100 µg/mL 的缓冲盐水溶液（无离子去污剂）中发送。如果提供的抗原浓度为 500 µg/ml，则缓冲液中可以接受以下添加剂（最大浓度）：2 mM DTT（二硫苏糖醇）、1 mM 2-巯基乙醇、1 mM EDTA、10% 甘油、200 mM 咪唑（在这种情况下不含 NaCl）、0.1% 麦芽糖、甘露醇和海藻糖、300 mM NaCl（在这种情况下不含咪唑）、1 M 尿素、1% Triton 100、1% Tween 20、1% b-辛基葡萄糖苷、0 ,1 % SDS。添加剂对动物有毒，例如蛋白酶抑制剂如 1ug/ml Leupeptin, 0.1 mM PMSF, 0.1 mM DIPF, 1 ug/ml Pepstatin A, 应避免使用叠氮化钠。

如果抗原不可溶怎么办？

通常可以注射不溶性抗原。如果这些颗粒可以通过 18 号针头，它可能会起作用。建议不要使用 SDS 等去污剂来溶解抗原。抗原/缓冲液混合物将与佐剂混合制成乳液，以确保制备均匀。您还可以运行凝胶的多个泳道并切出感兴趣的条带，然后将凝胶包埋的蛋白质作为样品发送给我们。

SICGEN 是否提供肽合成服务？

是的，我们使用外部资源，这还需要 3-4 周的时间。平均费用为 25 欧元。每个氨基酸 20 毫克，纯度为 70%（通过 HPLC/质谱法测定）。

抗原亲和纯化需要多少抗原？

纯化50ml抗血清，约需2-10mg蛋白质或3-10mg冻干肽需要偶联到亲和基质柱上。产生的抗体产量可占总免疫球蛋白的 5% 至 10%，并且取决于免疫反应的质量。通常，最少可以获得 10 mg 的抗体。如果可用量较小，则可用于纯化的量较少。请查询。蛋白质不应含有甘氨酸或 Tris 缓冲液。

使用蛋白质 A/G 亲和层析纯化的产量是多少？

大多数山羊或绵羊抗血清的产量在每毫升 10 到 20 毫克 IgG 之间。

亲和层析纯化的产量是多少？

根据滴度，抗蛋白抗体可能产生 5 至 40 mg 特异性 IgG，而抗肽抗血清应根据免疫原性每 50 ml 抗血清产生 5-25 mg 特异性 IgG。

通常每只动物提供多少抗血清？

山羊/绵羊：150-200 毫升（SuperFast 方案）或 500-600 毫升（标准方案）。 F或将免疫方案延长至 200 ml 血清/月。

血清中特异性多克隆抗体的浓度是多少？

最常见的是，血清中特异性抗体的浓度在 0.05-0.2 mg/ml 血清之间。在特殊情况下，强多克隆血清每毫升血清可含有 1-3 毫克特异性抗体（或更多）。

可以以什么形式提供抗血清或抗体？

抗血清以不含防腐剂的原始液体形式提供。纯化的抗体在含有低水平防腐剂（通常为 0.1% 叠氮化物）的 PBS 中提供。抗体可在 -80oC 下保存数年。多次冷冻和解冻会使蛋白质变性，因此强烈建议一次性使用。

抗血清是如何测试的？

抗血清在第 28 天（超快速）或第 42 天（标准）时通过 ELISA 进行测试，作为内部质量控制。定制协议各不相同。我们认识到质量和可靠性质量对我们的客户来说是最重要的，除非抗血清具有最低良好效价 (>20,000)，否则我们绝不会让其上市；当客户要求时，将根据价目表对其他血液的额外 ELISA 测定收费。也可以通过额外收费的蛋白质印迹法和斑点印迹法等其他方法对其进行测试。

免疫方案的时间表是怎样的？

SICGEN 提供两种免疫方案。 SuperFast 和标准方案（参见免疫方案”页面）。但是，可以根据客户的要求对其进行调整，例如抗原的性质和数量。也可提供定制协议。请联系。

是否可以对 SuperFast 和 Standard 协议进行任何例外处理？

是的，是的。使用定制方案或请联系。

是否可以重复过去成功使用的免疫方案同一种抗原？

是的，它可以。该方案应通过抗体定制方案在线提交给 SICGEN 进行审查和评论，然后将被遵循。如有任何不符合标准化或定制协议的具体要求，请联系。

动物可以饲养多长时间？

没有自动最终放血或处置。可以将动物饲养数月或数年的相对较长的时间。客户决定动物的饲养时间以及最终放血或处置的时间。每次提供抗血清时，客户都会收到一封电子邮件回复，以传达他对动物维护的进一步要求。

能否在项目开始前测试少数动物的预免疫血清？

是的，根据要求，它会在项目开始前发送少量的免疫前血清样本。客户可以用 l 测试和选择最合适的动物最低的背景信号。

如何发送抗原？

最好的形式是可溶的或微不可溶的。抗原总量应装入几个 2 ml eppendorf 管中，每个管中含有 0.250 mg 抗原，溶于 PBS 或其他缓冲液中。没有必要在项目开始时发送所有抗原；更多可以稍后发送。在葡萄牙：我们建议使用邮局服务进行隔夜递送 (Correio Azul) 或快递公司（蓝冰和干冰包裹）。在欧洲/美国/加拿大或世界其他地区：请使用可靠的载体。

抗原应该放在干冰上吗？

应在客户认为抗原最稳定的条件下发送抗原。通常，大多数蛋白质应在干冰上运输。溶液中的肽和共轭肽也可以用干冰运输。大多数冻干抗原和与硝酸纤维素膜结合的抗原在室温下是稳定的，可以在室温下发送。凝胶片es 应该用冰袋（蓝冰）发送。

我可以使用自己的运输公司吗？

是的，请向我们提供您的快递员的姓名和帐号。

SICGEN 血清包裹在哪几天发货？

葡萄牙和欧洲境内的发货时间为周一、周二和周三。仅在星期一向美国加拿大和世界其他地区的客户发货。我们对所有货件都使用隔夜优先权。

SICGEN 收费多少？

我们确实对抗体生产项目有固定收费（见免疫包）。在线价目表显示了 SICGEN 对免疫包、运输或可选服务收取的费用。使用该系统允许 SICGEN 仅对您的抗体项目所需的服务收费。可应要求提供价格估算/报价，或使用我们的自动订单或报价生成器。

接受什么付款方式？

可以通过信用卡或使用 IBAN 的银行转账付款。请注意，一个任何银行或服务费用将退还给客户。通过银行转账付款的银行账户详细信息将与发票一起发送，也可以根据要求通过传真发送。也可以使用信用卡付款。

保证优惠包括什么？

保证报价涵盖以下服务：根据 SuperFast 或标准方案通过 ELISA 进行的滴度测试对一只山羊进行免疫接种，保证 SICGEN 生产的蛋白质和肽的最低滴度为 1:20,000。提供免疫前血清和至少 150-200 毫升（SuperFast）或 500-600 毫升（标准）具有保证滴度的抗血清和来自放血的额外血清（500-1,000 毫升）。

为了选择最合适的动物，这些动物对血清中的抗原没有任何反应，根据客户的要求，可以通过 ELISA 测试来自几只动物的免疫前血清。此服务将额外收费。

蛋白表达服务结束？

通过我们最佳优化的程序，您将从 4 升培养物中纯化出任意数量的蛋白质。但产量和纯度都无法保证。如果您得到的纯化蛋白少于 1 mg 和/或 SICGEN 设计的抗原纯度低于 75%，则无需付款。

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