本文介绍了免疫沉淀方案：免疫沉淀方案

本文介绍了免疫沉淀方案：

样品预清除

用 10X 体积的 RIPA 清洗蛋白 A- 或 G-Sepharose 或蛋白 L-Agarose缓冲液。涡旋并在微量离心机中离心 1 分钟。将沉淀物重悬到蛋白 A 或蛋白 G 基质所在的原始体积中。将蛋白 A-或 G-Sepharose 或蛋白 L-Agarose 添加到样品中并在 4 ℃孵育°C 振荡 30 分钟。在微量离心机中离心 1 分钟，沉淀吸收的非特异性蛋白质和不溶性物质。丢弃。

与一抗孵育

将一抗添加到预先清除的样品中，并在 4°C 下轻轻搅拌孵育 1 小时。添加蛋白-A 或 -G 琼脂糖珠并在 4°C 下孵育 1 小时温和搅拌。在微量离心机中离心 1 分钟。在 1 ml RIPA 缓冲液中清洗沉淀。重复两次。

去除抗体-抗原复合物

重悬免疫在含有 1% SDS 和 15 mM β-巯基乙醇或 8M 尿素的缓冲溶液中沉淀。在 90-100°C 下加热 5-20 分钟，偶尔涡旋。在微量离心机中离心 1-2 分钟。上清液准备就绪进行 Western blot 分析。

immunoreagents, Inc. 是全球领先的优质抗体和试剂制造商，产品用于药物研究、生命科学研究和体外诊断。产品供应包括范围广泛的免疫化学试剂，例如纯化的免疫球蛋白、一抗和二抗，涵盖来自不同物种的广谱免疫球蛋白。 ImmunoReagents 还提供定制生产以满足特定客户要求，同时遵守 cGMP 指南和 ISO 质量体系要求。公司位于罗利，北卡罗来纳州

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