exosome是直径约为30-150nm的小囊泡,在30年前被人们所发现。exosome天然存在于所有体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特异,早期的研究认为,exosome执行蛋白运输功能,特异靶定受体细胞,交换蛋白和脂类或引发下游信号事件。直到2007年,研究人员发现exosome也运输核酸,参与细胞间通讯。至此,这种小囊泡才被人重视,并成为热门的研究对象。细胞外微泡, 运载RNA(包括mRNA、miRNA、lncRNA)、DNA及蛋白质,为细胞间信号交流起着重要作用。
QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法,能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术,通过离心柱和特制缓冲液,从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程,从血清/血浆样本到RNA产物,只需1小时。
性能优势:
exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比,不仅速度更快,并且产物纯度更高。扫描电镜显示,虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡,但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构。
通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液
进行分析,结果显示,exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA,包括
细胞外囊泡的miRNA,且不含细胞。
操作流程 :
从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步:纯化exosomes和分离RNA。
在exosomes纯化步骤,预过滤的血浆(不包含大于0.8 μM的微粒)与Buffer XBP混合,加至exoEasay亲和性膜离心柱上,结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡,之后使用QIAzol裂解。
在RNA分离步骤,在QIAzol洗脱液中加入氯仿,回收水相,将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上,洗涤三次后洗脱。
产品信息 :囊泡RNA研究完整解决方案:
研究方案 | 产品 | 货号 | 目录价 |
纯化来自血清/血浆样本中 exosome中的RNA (含miRNA) | exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) | 77064 | 26420 |
exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit (50) | 77044 | 10560 | |
exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) | 77023 | 5790 | |
检测exosome中 miRNA产品套装 | miScript II RT Kit (12) | 218160 | 1450 |
miScript Primer Assay (100) | 218300 | 1060 | |
miScript SYBR Green PCR Kit (200) | 218073 | 5380 | |
miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control | 219610 | 560 | |
检测exosome中 lncRNA产品套装 | RT² First Strand Kit (12) | 330401 | 2640 |
RT² lncRNA qPCR Assay (200) | 330701 | 1590 | |
QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) | 208054 | 2880 | |
检测exosome中 mRNA产品套装 | RT² First Strand Kit (12) | 330401 | 2640 |
QuantiTect® Primer Assay (200) | 249900 | 900 | |
QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) | 208054 | 2880 |
规格解释 :
产品货号 | 产品名称规格
Y5-77023 | exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20)10 次Maxi大抽+ 10 次Midi中抽
Y5-77044 | exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit(50)50次;一次最大抽提1ml血浆/血清
Y5-77064 | exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50)50次;一次最大抽提4ml血浆/血清
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