1a)收集转瓶培养的细胞：将5×10⁸〜10×10⁸细胞置1L的塑料瓶1850g离心20min。轻轻倒去上清并丢弃，将细胞转入50mL锥形刻度离心管中（每管2〜3L培养液中的细胞）。进行步骤2。

1b)收集单层培养的细胞：单层细胞长满后去掉培养液。用足量PBS洗1次，PBS用量为没过细胞，轻轻振荡，弃PBS。将细胞刮入新鲜PBS液里，倒进锥形刻度离心管中。进行步骤2。

2)1850g离心10min。进行步骤3a转瓶培养或步骤3b单层培养。

3a)转瓶培养细胞：轻轻倒出上清并弃掉。用离心管上的刻度测量压紧后细胞的体积(Pcv)将细胞重悬于约5倍于其pcv的PBS液中。1850g离心10min。进行步骤4。

3b)单层培养细胞：轻轻倒出上清并弃掉。用离心管上的刻度测量pcv,进行步骤4。

4)快速地将沉淀的细胞重悬于5倍体积的低渗缓冲液中1850g离心10min并弃掉上清。

5)将细胞沉淀重悬于3倍于原pcv的低渗缓冲液中，放置在冰上10min，让细胞肿胀。

6)将细胞转到Dmmce氏玻璃匀浆器中，用B号研杵上下抽提10次。用台盼蓝染色排斥法在显微镜下检査细胞裂解情况（应大于80%〜90%)。

7)将细胞转到离心管中。用JS4.2转子3300g离心15min收集细胞核。保留上清用来制备S-l00细胞质提取物。

8)用离心管上的刻度测量第7步离心压紧后的细胞核体积（pnv)。用l/2pnv体积的低盐缓冲液重悬细胞核。

9)在轻轻搅拌的同时，逐滴加入1/2pnv体积（见步骤8)的高盐缓冲液。必要时用Dounce氏玻璃匀装器混匀。

10)不断轻轻搅拌30min以提取核内容物。

11)用BeckmanJA-20转子25000g离心30min以收集核提取物。倒出上清并测量其电导率（见步骤12)，这就是核提取物。

12)将核提取物加入透析管中，用夹子至少封住透析袋的一端；透析袋一端是打开的，这样就可以测量透析袋内核提取物的电导率，比较核提取物电导率和透析液电导率的不同，以确定是否需要进一步透析。在50倍体积的透析液中进行透析，直到提取物的电导率和透析液一致为止（即提取物的KCr浓度达到100mmol/L时）。尽量缩短透析时间。

取5〜10μl提取物用水稀释至1mL用来测电导。用电导测量仪直接读出稀释液的电导值，与同样稀释的透析液的电导值相比较。

13)将提取物从透析袋中移出，最后一次检测其电导率以确定透析已经完成。将提取物25000g离心20min,弃掉沉淀。

14)测定上清中蛋白质浓度。根据需要分装，浸入液氮中速冻，-80℃保存。

所有步骤的操作均在0〜4℃进行，在冷室内操作更好。缓冲液和设备要预冷。所有离心均在4℃进行，转子要预冷。