品牌： EZ-CasTM CRISPR-Cas9 货号： HMG-1401 供应商： 仁源生物 数量： 大量产品：EZ-CasTM CRISPR-Cas9哺乳动物细胞表达载体构建试剂盒（目录号：HMG-1401）产品说明：本试剂盒用于在哺乳动物细胞中对靶基因进行完全基因敲除或敲入。试剂盒中的载体含有一个用于插入SgRNA的克隆位点，一个用于转录SgRNA的人U6启动子，一个受高效CAG启动子驱动的Cas9酶基因，以及Puro抗性筛选基因，因此可以更加方便地对发生基因敲除细胞进行筛选。需要注意的是，如果想要敲除的目的基因对于细胞的存活或增殖所必需，则极有可能难以获得完全基因敲除的细胞，但是依然可以获得只有一个同源基因敲除的“杂合子”细胞系。

规格：4 reaction OR 10 reaction OR 50 reaction三月开学大促，针对有科研实验能力的小伙伴们可申请仁源生物的CRISPR-Cas9哺乳动物细胞表达载体构建试剂盒，自己动手体验基因敲除的乐趣。数量有限，先到先得！0元活动赶紧行动起来吧！活动时间：2017.3.23-2017.4.1

1401说明书节选：1 试剂盒概述：本试剂盒用于快速CRISPR-Cas9载体构建，实现在哺乳动物细胞中对目标基因进行定点“基因敲除”或“基因敲入”。 2 本试剂盒内容：（1） pHMG-SgRNA线性化质粒 (20ng/μl，□10ul □50 μl)（2） pHMG-SgRNA测序引物(5’-GACTATCATATGCTTACCGT-3’, 10 μM，□10ul □50 μl)本试剂盒不提供，但可能需要：（3） 感受态大肠杆菌(如:DH5α)（4） T4 DNA连接酶及缓冲液3 保存条件：－20℃4 连接产物转化后长不出细菌克隆？4.1 仔细检查感受态大肠杆菌的转化效率；一般情况下，感受态大肠杆菌的转化效率需要达到＞1×107。如果转化效率过低，请更换新的感受态大肠杆菌。4.2 仔细检查T4 DNA连接酶活性；如果活性过低，更换新的T4 DNA连接酶。5 针对同一个目的基因，应当设计几条SgRNA序列？5.1 我们的经验是，当设计3条SgRNA时，多数情况下至少可以挑到1条有效的SgRNA。5.2 设计时，尽可能在目的基因不同的外显子上分别设计SgRNA，避免将SgRNA设计在同个外显子的同一区域。6 如何检测SgRNA的作用效率？6.1 将含有SgRNA的质粒瞬时转染至测试细胞系(如：人胚肾细胞系 HEK293, 鼠成纤维细胞系 NIH3T3)。转染后24小时，加入含有Puromycin (终浓度：1~3μg/mL)的培养液继续培养48~60小时，此时＞90~95%的细胞会死亡。换至不含Puromycin的培养液中继续培养24~48小时。收取细胞，取一半的细胞制备基因组DNA，另外一半细胞置于－80℃冻存备用。6.2 在目标片段上、下游各约100~200bps的区域各设计一条PCR引物，以上一步获得的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，并对PCR产物进行直接测序。6.3 如果SgRNA能够在目标区域发生剪切，在SgRNA识别区域附近，PCR产物的测序结果就会出现主峰与杂峰并存的“套峰”现象(如下图)。当杂峰峰值超过主峰的20~30%，则认为SgRNA作用效率较高，可以进行后续的实验。7 本试剂盒可以做定点“基因敲入”吗？可以。做“基因敲入”时需要用到供体DNA；供体DNA需要有上、下游的同源臂。具体参见参考文献：Nature Protocol, Vol.8, No.11, pp2281-2308。更有其他优惠等着您。三月开学促销活动详情如下：

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