question 【求助】Pierce 公司的EMSA kit用过的指点一下 哦!
11月分买了pierce公司的EMSA kit
Kit里的control做了几次都做不出来条带
Kit的灵敏度也没有达到说明书里所说的那么高(用我合成的探针来做的)
大家谁用过的指点一下哦
另想问一下:半干转和湿转哪个效率更高啊?相差多大?
多谢了!
leesmart_2005 2006-12-11
  • 我通常是用湿转的,如果你的探针有问题,我可以送你些,不过我这里只有NFKB,如果你在北京的话,我可以帮你做,嘿嘿 我已经做了好多次了,呵呵
  • 想起来做蛋白的话,现在实验室湿转的装置一般都有的哦,很常用的哦
answer全部回答 (共 3 条)
  • 谢谢你的回答可惜我是在上海哦,不然可以当面请教你了,呵呵kit里带的control我做了好多次都没有作出来,探针量加大了2倍,3倍还是没有出来条带,后来就放弃做它的control但是做我的样品时,我用的探针量是每个反应100fmol,没有出来任何条带后来我摸探针浓度梯度,100pmol探针对照出来浓的条带,2pmol就是没有条带了,是否说明kit的灵敏度没有达到说明书里的20fmol啊关于转膜,我以前一直用湿转,发现效率很低,就换了半干转,听说效率高些,我自己也不清楚,总体来说发现转膜效率挺低的,不知道转膜条件怎么优化,效率具体可以达到多少呢?非常感谢!!
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