Invitrogen脂质体2000 （11668-027）使用说明
产品名称：脂质体2000
货号：11668-027
规格：0.75ml
脂质体2000
Invitrogen脂质体2000 （11668-027）描述：
Lipofectamine 2000转染试剂是一种多用途转染试剂，可在各种贴壁和悬浮细胞系中提供转染。研究人员可使用Lipofectamine 2000试剂进行基于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。Lipofectamine 2000是Life Technologies提供的用于siRNA和质粒DNA共转染的试剂。
采用Lipofectamine 2000试剂，您可以实现：
在各种细胞系中具有的转染效率和高重组蛋白表达水平 (表1)
出众的siRNA和质粒DNA共转染性能
适用于高通量应用的可靠性能
建立稳定细胞系的极好的选择
I Invitrogen脂质体2000 （11668-027）是广大老师所熟知的转染试剂，其特点：转染步骤快速简便。以它为例，我们介绍一下脂质体转染试剂的操作流程、注意事项等。
一、操作流程
事实上Lipofectamine系列产品操作流程都是又快又简单：稀释DNA以及Lipofectamine 2000，混合2种稀释液保温20分钟，加入培养细胞中孵育24－96小时检测结果。下面是Invitrogen提供的详细流程和注意事项。
1、转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2、对于每孔细胞，使用50 l无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8 g-1.0 g DNA。
3、对于每孔细胞，使用50 l OPTI-MEMⅠ培养基稀释1 l-3 l LIPOFECTAMINE 2000试剂。Lipofectamine 2000稀释后保温5分钟（在30分钟内同稀释的DNA混合。保温时间过长会降低活性。） 注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。如果D-MEM做为Lipofectamine 2000的稀释液，必须在5分钟内同稀释的DNA混合。
4、混合稀释的DNA（第2步）和稀释的Lipofectamine 2000（第3步）。在室温保温20分钟。 注意：溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。
5、直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.5ml无血清培养基。
6、在37℃，5％的CO2中保温24-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。
7、在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
8、对于96孔板培养，不再需要提前一天进行细胞铺板，而可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H，293-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的转染使得Lipofectamine 2000非常适用于96孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。
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