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活体成像两种检测技术介绍
活体成像 | 特点 | 优点 | 缺点 |
生物发光检测 bioluminescence | ★荧光素酶（Luciferase）对基因、细胞和活体动物进行标记； ★荧光素酶催化底物（例如荧光素钾盐）反应后，会产生化学发光。这种光是由化学反应而来，不需要激发光； ★标记方法是通过克隆技术，将荧光素酶的基因插入到预期观察的细胞染色体内，通过对克隆细胞进行筛选，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。再将细胞株转移至特定的小鼠体内形成模型。 | ★特异性强，无自发荧光； ★高灵敏度，在体内可检测到几百个细胞，检测的深度在3-100px； ★定量精确 | ★信号较弱，检测时间较长；★仪器精密度要求较高； ★细胞或基因需要转基因标记； ★不可用于人体，不适用于抗体、多肽等标记 |
荧光检测 fluorescence | ★采用荧光报告基因 (GFP、RFP等) 或荧光染料进行标记； ★需要外接激发光源，利用报告基因、荧光蛋白质或染料产生的荧光，就可以形成体内的生物光源。 | ★荧光染料、蛋白标记能力强； ★信号强，成像速度快，操作简便，实验成本较低； ★未来可用于人； ★适用范围广，可以是动物、细胞、微生物，也可以是抗体、药物、纳米材料等。 | ★存在自发荧光，影响灵敏度； ★光容易被动物组织吸收； ★检测深度受限； ★背景光干扰，定量准确度低 |
★活体技术荧光检测
荧光蛋白标记 | 适用于标记细胞、病毒、基因等，通常使用的是 GFP、EGFP、RFP（DsRed）等； | |
荧光染料标记 | 适用于标记抗体、多肽、小分子药物等；常用的有 Cy3、Cy5、Cy5.5 及 Cy7 | |
量子点标记（新的标记方法） | 适用于标记肿瘤，主要应用在活细胞实时动态荧光观察与成像； 量子点（quantum dot) 是一种能发射荧光的半导体纳米微晶体，外观恰似一极小的点状物。量子点荧光比有机荧光染料的发射光强的 20 倍，稳定性强 100 倍以上，具有荧光发光光谱较窄、量子产率高、不易漂白、激发光谱宽、颜色可调，并且光化学稳定性高，不易分解等诸多优点。 |
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