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question 【求助】RNA干扰试验中，无关序列和空载体是否都要做？
最近做RNA干扰的实验，也看了一些关于RNA干扰实验的文章，发现一个问题：

第一种情况：有的实验是合成3个干扰序列并构建3个干扰载体，然后在细胞水平检测时的分组是：3个干扰载体组、1个空载体组和1个未转染组；

第二种情况：有的实验是合成3个干扰序列及1个无关序列，共构建4个载体，然后再细胞水平检测时分组是：3个干扰载体组、1个空载体组、1个无关序列载体组和未转染组；

请问无关序列一定要做吗？我看有些文章都不做无关序列啊？！如果实验是第一种情况，会不会有人问：你为什么不做无关序列的对照？这样我怎么回答啊？！请各位大大帮忙解答，谢谢！
zhanggongdoctor 2010-04-07
  • blank vector is an option, but the random sequence of RNAi is a must.I suggest you do both.
  • 呃！版主亲自回复，好激动哦！终于知道了，呵呵，谢谢版主！
  • 你要发好文章的话，这两个对照都是要做的。
  • 不好意思，我看到有的论文里面是这样的：在细胞里面检测的时候，是干扰载体（一般都是3个）组、空载体组、无关序列组和未转染组；但是在裸鼠里面做的时候，是干扰载体（效果最好的）注射组、无关序列注射组、PBS注射组和细胞注射组。请教：1.为什么在裸鼠里面不用做空载体组了呢？2.有时候看到的论文在裸鼠里面不是做的无关序列注射组，而是用的空载体组，那么在裸鼠实验的时候是不是只做其中一个就OK了？谢谢
  • 不好意思，昨天没看清楚。我以为你是说空白细胞组和无关序列组去了，这两个是都要做的。如果是空载体组和无关序列组，一般做一个就行了。我们公司叫做KB组和HK组。有的杂志是接受KB组的，但是也有的杂志要求，必须要用HK组。也就是说，hU6启动子后面带一段无关序列，理论上不会干扰任何基因。这样，其对照说服力比较强一点。
  • 了解了 最好是做个无意义序列组
  • 这个话题细胞技术版正在讨论，有问题可以到那里问问http://cell.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=17286754&sty=1&tpg=1&age=0
answer全部回答 （共 8 条）
  • 楼上说的有道理感谢分享我也有用这类载体
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