苏州蚂蚁淘生物科技有限公司成立于2009年，是一家专业提供实验室整体采购方案的专业公司，为广大采购和实验室解决了大量问题，几年来已经成为几乎所有合作伙伴最优秀的合作伙伴，我们一直秉承信誉第一的原则，坚持不卖假货，哪怕利润损失也要为客户提供最好的产品。

我们已经和国外500多个品牌建立了贸易往来，并在国际上享有相当知名度，现已经成为国外近100个品牌中国指定代理，并成为其中国最优秀的代理商。我们部分客户1：经销商代表---国药化试，飞世尔，SIGMA，等1000家左右的经销商2：学校代表---北京大学，清华大学，上海交通大学，复旦大学，浙江大学，武汉大学，厦门大学.....等200所左右大学及100多家附属医院3：制药公司代表：罗氏，阿斯利康，诺和诺德，和记黄埔，东阳光科......4：CRO公司代表：睿智化学，药明康德，桑迪亚，美迪西......我们现有代理品牌如下，还在不断增加中

如何通过ChromoTek公司GFP-Trap如何设计成功的IP实验？使用ChromoTekGFP-Trap®时如何计划GFP融合蛋白的免疫沉淀序言本文档提供有关如何应用ChromoTekGFP-Trap®进行免疫沉淀的实用信息。简介ChromoTekGFP-Trap®基于源自羊驼单可变域抗体（也称为VHH或纳米抗体）的GFP结合蛋白（图1）。当应用于免疫沉淀时，GFP-Trap具有特殊的性能，并提供了优于传统IgG抗体的一些优势。实验计划在计划使用ChromoTekGFP-Trap®进行感兴趣的GFP融合蛋白的免疫沉淀时，应考虑一些实验方面。下面，我们指导您完成每个步骤。共有3种矩阵：

特征	琼脂糖珠	磁性琼脂糖珠	磁珠
矩阵	琼脂糖，4％高度交联	琼脂糖，6％交联	无孔二氧化硅
颗粒尺寸	45-165微米	20-40微米	0.5-1微米
装订能力	每10μl珠浆2-3μg	每10μl珠浆2-3μg	每10μl珠浆0.5μg
磁性	没有	是	是

预清除：预清除是除去与固相支持物非特异性结合的蛋白质或DNA的可选步骤。它包括在用GFP-Trap进行实际的免疫沉淀实验之前，将细胞提取物与普通珠子（例如结合对照琼脂糖珠子）一起孵育。在成功进行预清除后，非特异性蛋白质或其他成分将不会与目标蛋白质共同纯化。CRAPome：从本质上讲，每个基质和结合分子都可能非特异性地结合某些蛋白质，从而导致蛋白质背景。科学家们在www.crapome.org上建立了基于互联网的数据库CRAPome。该数据库存储并标注了蛋白质组学研究社区生成的阴性对照。CRAPome有助于确定背景污染物，例如与固相支持物，亲和试剂或表位标签相互作用的蛋白质。特异性-GFP-Trap®捕获哪些荧光蛋白GFP-Trap®与大多数常见的GFP衍生物特异性结合：

荧光蛋白	GFP-Trap®		荧光蛋白	GFP-Trap®
（e）绿色荧光蛋白	√	（e）柠檬黄	√
标签GFP2	√	荧光蛋白	√
涡轮绿色荧光蛋白	--	超级文件夹GFP	√
三叶草	√	微蓝藻	√
YFP	√	pH值	√
CFP	√	GFP S65T	√
金星	√	--	--

ChromoTekGFP-Trap®仅结合正确折叠的活性GFP。据信这是因为纳米抗体结合了GFP的三维表位。纳米抗体细长的CDR3（互补决定区3）可进入蛋白质的裂口和酶促中心，这是常规抗体无法接近的，但会导致该GFP纳米抗体具有非常强的结合力和非常低的解离常数。因此，抗GFP纳米抗体不适用于蛋白质印迹中的蛋白质检测。对于GFP（融合蛋白）的Western印迹检测，ChromoTek建议使用传统抗体抗GFP抗体3H9（大鼠单克隆抗体，请参阅互补产品）。对照-我应该采取哪些对照来验证实验数据？下面根据应用找到一些建议：对于免疫沉淀（IP）：•用于GFP融合物IP的GFP-Trap®和不相关的Nano-Trap作为阴性对照，例如Myc-Trap®，GST-Trap或MBP-Trap对于蛋白质复合物AB的免疫共沉淀（Co-IP）：细胞裂解–准备细胞裂解液时要考虑什么？裂解缓冲液：•非变性裂解缓冲液适用于Co-IP，因为蛋白质将保持其天然构象•RIPA（放射免疫沉淀测定）缓冲液可能会使蛋白质变性或破坏蛋白质复合物抑制剂：•添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解！•保留蛋白质的翻译后修饰，并添加例如磷酸酶抑制剂！•通过将样品放在冰上来防止蛋白质降解！免疫沉淀– GFP融合蛋白的结合由于GFP结合蛋白与珠子表面共价偶联，因此GFP-Trap®珠子即可使用，可以直接添加到制备的裂解物中。GFP纳米抗体的亲和力在皮摩尔范围内，因此GFP融合蛋白的消耗可以在5到30分钟内完成。GFP-Trap®的缓冲液兼容性，可用于结合和洗涤GFP-Trap®与大多数洗涤缓冲液兼容，并在恶劣条件下稳定，包括：•最高1 M NaCl和8 M尿素•最高0.2％SDS和2％NP -40洗脱策略用竞争性肽代替GFP融合蛋白洗脱结合的GFP融合蛋白无效。此外，由于GFP-Trap®在变性条件下起作用，因此添加诸如尿素的离液化合物不会使GFP-融合蛋白键化。因此，我们建议用以下方法洗脱：•SDS（例如SDS样品缓冲液）是洗脱结合的GFP标签蛋白的非常有效的方法。洗脱导致变性的GFP融合物。•0.2 M pH值为2.5的甘氨酸可选地，您可以使用pH 2.5的甘氨酸洗脱。建议重复此洗脱步骤，因为pH转换洗脱不能完全起作用。重复将提高洗脱效率。非常重要：洗脱后不要忘记立即中和蛋白质！作为上述洗脱选择的替代方法，可以引入GFP与融合蛋白之间的蛋白酶切割位点。如果结合了不稳定的蛋白质或想要富集感兴趣的天然蛋白质，则建议使用此选项。此外，考虑您是否真的需要从微珠上洗脱目标结合蛋白，而不是在\"微珠”上进行下游分析：•仍与微珠偶联时可以消化蛋白质，以进行后续的质谱分析。•如果未阻断活性中心，则仍可与磁珠偶联时可以进行酶活性测定。可重复性GFP-Trap®是一条细小，可溶性和稳定的单多肽链，可在细菌中重组表达。这与质量控制相结合，使其生产稳定且可重复生产，从而获得可靠的结果。介绍纳米抗体及其应用的精选参考文献：纳米抗体作为体外和细胞内蛋白质动力学探针的Dmitriev，OY，Lutsenko，S.和Muyldermans，S.在：生物化学杂志，2015 – jbc-R115。使用荧光融合蛋白进行生化和功能研究的多功能纳米阱Rothbauer，U.，Zolghadr，K.，Muyldermans，S.，Schepers，A.，Cardoso，MC，Leonhardt，H. in：Mol Cell Proteomics，2008 Feb; 7 （2）：282-9。EPUB 2007年10月21日基于纳米抗体的产品作为研究和诊断工具De Meyer，T.，Muyldermans，S。和Depicker，A .：《生物技术趋势》，2014年5月；32（5）：263-270;用于免疫亲和纯化和免疫灌注色谱的单域抗体片段的有益特性Verheesen P.，Ten Haaft MR，Lindner N.，Verrips CT，de Haard JJW in：Biochim。生物物理学。Acta，2003；1624（1-3）：21-28一种用于活细胞单分子成像的高特异性金纳米探针Leduc，C.，Si，S.，Gautier，J.，Soto-Ribeiro，M.，Wehrle-Haller，B.，Gautreau，A.，.Giannone， G.，Cognet，L.＆Lounis，B.，in：纳米字母，2013：13（4），1489-1494。基于纳米抗体的染色质免疫沉淀。DUC，TN，Hassanzadeh-Ghassabeh，G.，Saerens，D.，Peeters的，E.，沙利耶，D.，＆Muyldermans，S.在：单结构域抗体：方法和协议，2013：491-505

产品名称	尺寸	码
GFP-Trap®A▶偶联琼脂糖珠	10 rxns（250µl树脂）	GTA-10
20 rxns（500µl树脂）	GTA-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	GTA-100
200 rxns（5ml树脂）	GTA-200
400 rxns（10毫升树脂）	GTA-400
GFP-Trap®A试剂盒▶GFP-Trap®A▶包括裂解液和洗脱缓冲液	20 rxns（500µl树脂）	gtak-20
GFP-Trap®MA▶偶联到琼脂糖磁珠上	10 rxns（250µl树脂）	gtma-10
20 rxns（500µl树脂）	gtma-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	gtma-100
200 rxns（5ml树脂）	gtma-200
400 rxns（10毫升树脂）	gtma-400
GFP-Trap®MA试剂盒▶GFP-Trap®MA▶包括裂解液，洗涤液和洗脱液	20 rxns（500µl树脂）	gtmak-20
GFP-Trap®M▶耦合到磁性颗粒	10 rxns（250µl树脂）	gtm-10
20 rxns（500µl树脂）	gtm-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	gtm-100
200 rxns（5ml树脂）	GTM-200
400 rxns（10毫升树脂）	gtm-400
GFP-Trap®M试剂盒▶GFP-Trap®M▶包括裂解液，洗涤液和洗脱液	20 rxns（500µl树脂）	gtmk-20
GFP- MultiTrap®▶黑色96孔板	96 rxns（1个板）	gtp-96
480 rxns（5个板）	gtp-480
GFP-Trap®▶解偶联蛋白	250微升	gt-250
旋转柱	10台	sct-10
20伙	sct-20
50单位	sct-50
绑定控制▶琼脂糖珠	500µl（20 rxns）	婴儿20
结合控制▶磁性琼脂糖珠	500µl（20 rxns）	单克隆抗体20
装订控制▶磁性粒子	500µl（20 rxns）	bmp-20
GFP抗体（3H9）▶大鼠单克隆	100微升	3H9

德国 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究，公司拥有强大的研发团队，有先进的生物制剂，主要主要使命是花费较少的时间和成本，使客户获得得高质量的实验数据。

ChromoTek的产品分类：

一、Nano-Trap系列；以产品结合物为标准，包含磁珠系列和琼脂糖珠子系列，还有96板系列；抗体结合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap

二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；

三、 可用于HCA 实验的Chromobodies(质粒或细胞系形式)；

四、 高品质抗体（标签蛋白抗体和普通抗体）；

ChromoTek德国 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究，公司拥有强大的研发团队，有先进的生物制剂，主要主要使命是花费较少的时间和成本，使客户获得得高质量的实验数据。

ChromoTek GmbH开创了一类新的免疫学研究工具，该工具源自细胞生物学和蛋白质组学的单域骆驼抗体。ChromoTek成立于2008年，由Ulrich Rothbauer周边的一个研究团队从慕尼黑路德维希马克西米利安大学（LMU）分拆而来，现已迅速发展成为著名的创新试剂供应商和大型制药公司值得信赖的服务提供商。我们的管理团队结合了互补的技能和经验，形成了持续增长的基础。

ChromoTek

ChromoTek GmbH pioneers a new class of immunologic research tools derived from single domain camel antibodies for cell biology and proteomics. Founded in 2008 as a spin-off from the Ludwig-Maximilians University Munich (LMU) by a research team around Ulrich Rothbauer, ChromoTek has rapidly developed to become a renowned supplier of innovative reagents as well as a trusted service provider for big pharma. Our management team combines complementary skills and experiences that form a basis for sustained growth.

我公司长期供应常规性的生物试剂，耗材批发零售。秉承质量第一信誉至上售后完善以客户标准为原则，为新老客户提供一个值得信任的平台。各种优势产品：life（脂质体2000，3000），Gelred(核酸染料)。Trizol，TRIzol®LS。罗氏潮霉素B。二甲基亚砜(DMSO)。HyClone培养基。gibco双抗胰酶B27胎牛血清(16000-044)胎牛血清(10099-141)等。CST，ABcam，santa抗体。日本同仁CCK-8试剂盒。西班牙琼脂糖。另有sigma，amresco原装试剂大量现货。以上报价均为市场报价，仅供参考！欢迎新老客户咨询选购！18915418616

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