Enhanced super CMV promoterEnhanced super CMV promoter

RNA聚合酶II是驱动数千个基因表达的主要启动子类别。其转录机制已被广泛研究。它涉及许多转录因子和顺式调控 DNA 元件的组合阵列。核心启动子和辅助调节子这两个部分已被很好地表征为转录起始复合物。

核心启动子定义为足以指导 RNA 准确启动转录的连续 DNA 序列的最小延伸聚合酶 II。共调节子是其他顺式作用 DNA 序列，包括近端启动子、增强子、沉默子和边界/绝缘子元件。

核心启动子：它在转录起始位点向上游或下游延伸约 37bp ，其中包括BBE（TFIIB识别元件）、TATA盒、Inr（启动子）和DPE（下游启动子元件）（见下图示意图，Jennifer 2002).

Co-regulators：近端启动子是紧邻转录起始位点的区域（大约从 -250 到 +250 nt）。转录增强子和抑制子的结合位点可以位于距离转录起始位点许多 kbp 的位置，并且可以激活或抑制转录。

Gentarget 在排列各种 poly II 启动子后设计了野生型 CMV 启动子区域，并在上游增强​​子、Inr 和 DPE 内部进行了一系列突变。我们通过考察以下几个方面来筛选重组CMV启动子的效率：

上游调控区最好的增强子；TATA盒的必要性；多少DPE提高转录效率；转录间间隔区长度的影响起始位点和翻译起始位点；Intron 在下游调控元件中的作用；

我们专有的 suCMV 启动子有 6其增强子区域的突变，核心启动子区域内的 3 个突变，转录和翻译起始位点之间的优化间隔距离，以及转录位点下游的人工内含子。根据细胞类型，这个 suCMV 启动子表现出 4 到 6 倍的高翻译效率比 pCDNA3.1 高，比 pcDNA3.3 高 2 到 3 倍（见下图 3）。

这个工程化的超级CMV启动子具有最强的选择转录/翻译效率并将其整合到我们的慢病毒载体和 Eco-PCR 克隆表达载体中。

参考：

Jennifer E.F. Butler1 和 James T. Kadonaga。GENES & DEVELOPMENT 16:2583-2592 , 2002.Tamar JG, et al. Rational design of super core promoter that enhances gene expression. NATURE METHOD. V3(11):917-922, 2006.Nikolov, D., H. et al. TFIIBTBP- 的晶体结构TATA 元素三元复合物。Nature 377: 119-128, 1995.MICHAEL HAMPSEY 微生物学和分子生物学评论, 1998, p. 465-503Bookmark the permalink.Post navigation← PCR cloning -never been easierHigh Efficiency protein delivery →Recent PostsAbout Gentarget\'s Lentivirus ServicesCOVID-19 Delta Variant and other mutationsSARS-CoV-2 Virus-Like ParticlesStable Cell Line Express COVID-19 S Protein COVID-19 大流行何时结束?Archives八月 2022十月 2021九月 2020八月 2020七月 2020五月 2020七月 2013

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