我公司长期供应常规性的生物试剂，耗材批发零售。秉承质量第一 信誉至上 售后完善 以客户标准为原则，为新老客户提供一个值得信任的平台。各种优势产品：life （脂质体2000，3000），Gelred(核酸染料) 。Trizol，TRIzol® LS 。罗氏潮霉素B。 二甲基亚砜(DMSO)。HyClone培养基。gibco 双抗 胰酶  B27  胎牛血清( 16000-044)  胎牛血清( 10099-141)  等。 CST ，ABcam ，santa抗体。日本同仁CCK-8试剂盒。西班牙琼脂糖。另有 sigma，amresco原装试剂大量现货。以上报价均为市场报价，仅供参考！欢迎新老客户咨询选购！18915418616

Genemay>>>蛋白质印迹法
1.将所需细胞放入微量离心管中并离心以收集细胞沉淀。
2.在冰上用100 µl裂解缓冲液裂解细胞沉淀30分钟。
3.在4 ^o C下以14000 rpm离心10分钟。
4.将上清液转移至新试管中并弃去沉淀。除去20 µl上清液，并与20 µl 2Xsample缓冲液混合。
5.煮5分钟。在室温冷却5分钟。微量离心5分钟。
6.在1.5 mm厚的凝胶的每个孔中上样40 µl样品。
7.设置凝胶运行条件，并根据制造商的说明将蛋白以可变的功率设置转移到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。
8.从转移设备上取下被弄脏的膜，然后立即置于由5％脱脂奶粉/ TBS-T组成的封闭缓冲液中。
9.将印迹在室温下孵育1小时，或在4 ^o C 下搅拌过夜。
10.用5％脱脂奶粉/ TBS-T将一抗稀释至建议的浓度/稀释。将膜置于一抗溶液中，在室温孵育2小时，或在4 ⁰ C搅拌过夜。
11.用洗涤缓冲液（含0.1％Tween-20的TBS）洗涤3次，每次5分钟。
12.将膜与HRP偶联的二抗在室温孵育30分钟，在5％脱脂奶粉/ TBS-T中稀释至1：1000。
13.用含0.1％Tween-20的TBS洗涤4次，每次10分钟，再用PBS洗涤2分钟。
14.用10 ml ECL孵育膜（蛋白质朝上）1-2分钟。所需的最终体积为0.125 ml / cm2。
15.排干多余的检测试剂，包好印迹，然后轻轻抚平气泡。
16.将包装好的蛋白质朝上的污点朝上放在X光胶片暗盒中，然后曝光X光胶片。曝光时间从5秒到60分钟不等。