Genemay>>> IHC对冷冻组织切片的染色1.将新鲜的组织小心地放在塑料模具中的OCT中，注意不要夹住组织周围的气泡。通过将模具放在液氮顶部冷冻组织，直到块的70-80％变白。然后，将块放在干冰上。冻结的块可以在-80 o C下 进行长期存储。2.对于切割步骤，将冷冻的块安装在低温恒温器支架上。从来，在任何点，让组织升温至温度高于零下15 ö Ç。3.让冷冻的块在低温恒温器室内平衡约5分钟。切开6-10mm的部分。当块温度是大约零下18至零下20最好部分通常获得Ò Ç。4.在室温下将切片干燥至少30分钟。注意：干燥后，薄纸可以在4 o C下保存几天；如果要长期保存长达几个月，请在-80 o C下保存。5.在室温下浸入丙酮罐中1-2分钟以固定切片，然后风干。使用PAP笔仔细绘制部分的边界，并使其干燥几分钟。6.将一抗（在0.05M Tris-盐水中稀释，pH 7.4，2.5％血清）直接添加到切片上。加入大滴以一次覆盖整个组织，以防止由于溶液的表面张力而导致切片破裂。在室温下于培养箱中孵育至少一小时。注意：将切片用Tris-saline重新补水后，切勿再次使组织变干（这会破坏组织结构）。7.在Tris-盐水中轻轻冲洗切片3-5分钟，然后在Tris-盐水/2.5%血清中再次冲洗3-5分钟。一种。如果使用生物素化的一抗，请跳过以下两个步骤（8和9），然后转到步骤10。如果使用纯化的第一抗体，则继续步骤8的操作。8.在不让切片变干的情况下，添加稀释于Tris-saline / 2.5％血清中的第二抗体。像以前一样孵育至少45分钟。9.按照步骤7所述进行洗涤。10.用约100 µl稀释的SA-AP或SA-HRP盖上玻片。在室温下孵育30分钟。11.按照步骤7所述进行清洗。12.染色玻片。一种。对于HRP，请与AEC底物一起孵育：每1ml 0.17 M NaOAc，pH 5.2加1µl H 2 0 2需加25µl AEC储备液（在DMSO中为4mg / ml）。孵育20-30分钟。b。对于AP，与AP底物一起孵育：在Tris-Saline pH 8.5中将Fast Violet（最终1mg / ml）+ Napthol AS-MX磷酸盐（最终0.2mg / ml，来自DMSO中的10mg / ml）在Tris-Saline pH 8.5中孵育10-20分钟，直到达到所需的阳性染色。13.用Tris-盐水冲洗2次。14.用Mayer /苏木精复染30秒，然后用自来水清洗2-5分钟。15.用固定介质固定盖玻片。16.阅读幻灯片。