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贴壁细胞操作流程：（贴壁细胞生长缓慢）

1）适当提高血清浓度（zui高不能超过20%）。

2）根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。

贴壁细胞操作流程：（生长不均）

贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

C-33A细胞培养（C-33A细胞说明书索取） 细胞包装：

复苏细胞（T25培养瓶×1 常温运输）

冻存细胞（冻存管、干冰包装低温运输）

新闻：

Ser294的磷酸化对PI4KIIIβ功能有什么作用？

磷酸化位点的突变使得PI4KIIIβ的脂激酶活性降低了60%。另外，与激酶失活的PKD突变体的显性失活效应相统一的，过量表达激酶死亡PKD1降低了PI4KIIIβ的脂激酶活性。

突变也降低了荧光标记的分泌型蛋白质从TGN到细胞表面的运输效率。PI4KIII的过量表达增加了标记蛋白到达细胞表面的数量。

总结起来，这些结果表明蛋白激酶和脂激酶对于分泌型蛋白运输过程都非常重要。

科研人员认为，PKD在TGN的功能就像是“瓶颈”一样进行调控：通过促使参与载体囊泡形成的蛋白质磷酸化，来控制分泌型分子的运输。

PI4KIIIβ是这些底物中的一员，通过PKD介导的磷酸化增强了它的脂激酶活性。这个过程进而增加了TGN膜中的PI(4)P数量。

因为PI(4)P数量和膜结合的ADP-核糖基化因子，被认为是介导载体囊泡形成的重要成员。接下来，对于研究者们的挑战将会是阐明载体囊泡形成的机制。

C-33A细胞培养（C-33A细胞说明书索取）

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