以下工作流程专为处理更高体积的血液（高达 500 微升）而设计，同时产生相似的 DNA 产量和每 100 µl 血液的浓度是通过标准方案获得的，用于提取较低体积的血液（最多 100 µl）——例如，如果使用 T3010 的标准血液方案从 100 µl 血液样本中分离 gDNA，会产生 4 µg DNA，使用以下方案从更高 500 µl 量的相同血液样本中提取 gDNA 应该会产生大约 20 µg gDNA。
使用基于 RBC 裂解的高体积和大量血液中的 DNA 分离Monarch gDNA 纯化试剂盒协议![\"\"](\"https://www.neb.com/-/media/nebus/page-images/products/monarch/monarch_gdna_rbc_yield_highervolume_0422.png?rev=030ea37c5f5e4b1f9bc20f4ba975da68&hash=0B15AECC3C25E7170468B5%20DBCEDBFD4C\")
使用 RBC 裂解法提取的 DNA 可实现与直接方法相似的高产量和浓度，同时允许从更高体积和更多的血液中提取。从 3 天大的新鲜猪血中一式三份纯化基因组 DNA 样品。对于直接裂解样品，使用来自 NEB #T3010kit 的新鲜哺乳动物血液的标准方案纯化 100 µl 猪血中的 DNA。对于 RBC 裂解样品，使用 NEB #T3010kit 和 RBC 裂解缓冲液 (NEB #T3051) 在方案中使用指定量的猪血，最多 500 µl 血液。所需但未提供的材料：
Monarch® RBC 裂解缓冲液 (NEB #T3051) – 该裂解缓冲液不包含在 Monarch Genomic DN 中纯化试剂盒Monarch® 基因组 DNA 纯化试剂盒 (NEB #T3010)每个样本一个 2 毫升反应管（或 1.5 毫升管，取决于处理的血容量）每个样本 100 微升冷 PBS开始之前：
如果使用新鲜血液，请勿在此工作流程中使用超过一周（7 天）的血液。确保 RBC 裂解缓冲液、PBS 和离心机冷却至 4°C。按照标准方案中的建议从 100 个样本中提取 gDNA微升血液用于储存试剂和其他具体说明。第 1 部分：样本裂解如果从新鲜血液开始：将 150-350 微升血液放入 1.5 毫升反应管中，或将 350-500 微升血液放入 2 毫升反应管中，并添加 3 个体积冷 RBC 裂解缓冲液。例如，向 500 µl 血液中添加 1500 µl 冷 RBC 裂解缓冲液。颠倒数次混合。在冰上孵育直至红细胞裂解。溶液会从浑浊变为透明红色。取决于 blo 的种类和年龄od 这将需要 3-12 分钟，新鲜血液比旧样本需要更长的时间。请勿在此工作流程中使用超过一周（7 天）的血液。一旦红细胞裂解变得明显，再在冰上放置 1-2 分钟以完成裂解过程。如果从冰冻血液开始：在 1.5 ml 反应管中加入 150-350 µl 冰冻血液，或在 2 ml 反应管中加入 350-500 µl 冰冻血液，向冰冻样品中加入 3 倍体积的冷 RBC 裂解缓冲液。通过短暂摇晃混合手动使冷冻血液上方的液体开始变红。将样品以 10-20 rpm 的速度置于端对端旋转器中，直到解冻（500 ul 血液样品大约需要 5 分钟）。样品完全解冻后涡旋短暂地确保剩余的细胞聚集体重新悬浮并置于冰上。在 4°C 下以 1000 x g 离心 3 分钟以沉淀白细胞。通过移液器小心地去除上清液。保持颗粒朝下并从顶部 si 移液在不干扰颗粒的情况下去除管子。尽可能多地去除液体。注意：不要倾析，因为过多的上清液会留在后面，导致产量降低。涡旋以重悬沉淀。加入 100 µl 冷 PBS 并短暂涡旋混合。向样品中加入 10 μl 蛋白酶 K、3 μl RNase A 和 100 μl gDNA 血液裂解缓冲液，并短暂涡旋混合。由于完整 DNA 的量相对较大，样品会形成泡沫。在热混合器中以最大速度（如果可用，为 2000 rpm，旧型号为 1400 rpm）在 56°C 下孵育 5 分钟。第 2 部分：基因组DNA 结合和洗脱添加 400 µl gDNA 结合缓冲液。以最大涡旋速度涡旋 5-10 秒彻底混合。继续血液方案第 2 部分的第 2 步：基因组 DNA 结合和洗脱。此资源的链接产品类别：基因组 DNA 提取和纯化、核酸纯化产品相关产品：Monarch ® 基因组 DNA 纯化在试剂盒上，MonarchRBC 裂解缓冲液>>> 更多资讯详情请访问蚂蚁淘商城
