主页工具和资源使用指南细菌 RNA 纯化指南细菌 RNA 纯化指南新鲜或冷冻的细菌可以使用君主总 RNA 小量提取试剂盒 (NEB #T2010) 进行处理。使用适量的起始材料。细菌的最大输入量为 1x109 个细胞。使用过多的样品会降低裂解效率，引入过量的细胞成分而不是 RNA，并损害 RNA 与 RNA 纯化柱的结合。在样品破碎和均质化之前，应沉淀液体培养中生长的细胞并去除所有培养基。机械对于革兰氏阳性菌和一些革兰氏阴性菌株，建议使用珠匀浆器进行裂解。或者，可以用聚糖酶（例如，溶菌酶）酶促裂解细菌。机械裂解或酶裂解方案可在产品手册中找到。一些革兰氏阴性菌（例如大肠杆菌）不需要机械裂解，可以直接裂解直接加入 1X Monarch DNA/RNA Protection Reagent 务必使用 1X Monarch DNA/RNA Protection Reagent 溶液。提供的 2X 浓缩液可用无核酸酶水稀释。冷冻样品保持冷冻状态，直至与 DNA/RNA 保护试剂混合。添加保护试剂后，立即进行机械裂解（例如珠子均质化）非常重要。如有必要，将样品在 Protection Reagent 中短暂置于冰上​​，直到它们可以被处理。添加 RNA 裂解缓冲液和所有后续步骤应在室温下进行。处理细菌样品不需要蛋白酶 K 消化。处理更高的样品输入量时（即 5 x107 – 1 x109 个细胞），需要更大体积的 1X DNA/RNA 保护试剂。因此，还需要更大体积的 RNA 裂解缓冲液和乙醇，并且必须重新加载柱子。为减少样品体积和柱子的重新加载，RNA 裂解缓冲液可用于机械裂解DNA/RNA 保护试剂。

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星号活性是限制酶的固有特性，描述了在次优反应条件下发生的不需要的切割和最终产物降解。当与不相容的缓冲液一起使用或在高酶浓度下使用时，会形成脱靶和降解产物。高保真 (HF®) 限制性内切酶经过精心设计，可降低星号活性，提高准确性cy 并避免不需要的切割。

HF® 是 New England Biolabs, Inc. 的注册商标。

了解高保真 (HF®) 限制性核酸内切酶更快的消化对结果准确性更有信心主页工具和资源使用指南 GRCh38hg38 NEBNext Direct® BRCA1/BRCA2 面板的床锉GRCh38hg38 NEBNext Direct® BRCA1/BRCA2 面板的床锉

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产品描述

1）BL21源增强型菌株

2）为了laclq的稳定性，将其插入到miniF质粒上

3）无需Cam

4）菌落快速培养

5）无动物来源产品

6）抗T1噬菌体感染(fhuA2)

概述：T7 表达 Iq E.coli 感受态细胞适用高效级转化和蛋白表达。

基因型：MiniF lacLq (CamR)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon]ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 Δ(mcrC-rr)114::IS10

特性：

1）在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体

2）通过 lacIq 进行严格调控，从而允许克隆潜在的毒性基因

3）Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失

4）不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率：高效级：0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

未被转化的细胞需要检测抗 Φ80 噬菌体感染的能力，这是检测抗 T1 噬菌体感染能力的标准检测法。此外，未转化细胞还要检测其对氨苄青霉素、四环素、卡那霉素和链霉素的敏感性。结果显示未被转化的该感受态细胞抗氯霉素。

随产品提供：

25ml SOC Outgrowth 培养基（室温贮存）

0.025 ml 50 pg/μl pUC19 对照 DNA（–20°C 贮存）

注意事项：感受态细胞应贮存于 –80°C，一旦融化，就不能再被冻存。–20°C 贮存会显著降低其转化效率。只要温度高于 –80°C，即使未被融化，细胞转化效率也会降低为零。

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